|
 |
 |
| Автор Администратор |
| 03.11.2005 г. |
| Изучали возможность замораживания спермы в открытой системе. Одним из важных условий для успешного консервирования органов, тканей, клеток является исходное состояние будущего трансплантационного материала. Криоконсервирование спермы донора Главная страница Для специалистов Репродуктология Журнал «Проблемы репродукции» Номера журнала за 2001 год №2 - 2001 Автор: Журнал «Проблемы репродукции» Дата публикации: 28.07.2002 07:03 Изучали возможность замораживания спермы в открытой системе. Одним из важных условий для успешного консервирования органов, тканей, клеток является исходное состояние будущего трансплантационного материала. В частности, при оценке исходного состояния эякулята, подготавливаемого для низкотемпературного консервирования, необходимо обратить внимание на следующие параметры: подвижность спермиев, их число в образце, переживаемость в течение 1-2 ч, морфологические характеристики спермиев, а также определить содержание акрозина, a-фетоглобулина фертильности и криоустойчивость гамет. В связи с возрастанием числа патологии, влияющей на репродуктивную функцию мужчин (ионизирующее излучение, физико-химические факторы, стрессы, инфекционные и онкологические заболевания и пр.), в некоторых случаях возникает необходимость использования спермы донора. Цель настоящего исследования - изучить влияние сред замораживания и отогрева на морфокинетические показатели спермиев человека при криоконсервировании их простым и доступным методом. Материал исследования Материалом исследования служили эякуляты, полученные у 44 мужчин в возрасте до 40 лет после 3-4-дневной половой абстиненции. Пробы собирали в стерильные чашки Петри или бюксы. Разжижение образцов происходило при 37°С в течение 30-60 мин. Морфологические повреждения оценивали в мазках, окрашенных эозин-нигрозином. Оценку спермокинезисграммы проводили компьютерным методом (CASA) на микроскопе Оlimpus SH-40 c программным обеспечением «Видеотест-4». С целью защиты спермиев на этапе криоконсервирования к эякуляту добавляли одну из исследуемых криопротекторных сред: 1. глицерино-желточную среду (ГЦЖ); 2. глицерин (10%), цитрат натрия, сахарозу; 3. ГЦЖ после центрифугирования. Были использованы две различные контролируемые скорости замораживания спермиев человека. В первой серии экспериментов замораживание проводили в открытой системе. Образцы, расфасованные в стерильные пластиковые апирогенные нетоксичные трубочки по 0,7-0,8 мл, герметично запаянные, помещали в ультратермостат и охлаждали со скоростью 1-2°С/мин до 10°С/мин, затем переносили в алюминиевый контейнер и продолжали охлаждение со скоростью 70°С/мин в течение 1 мин, после чего образцы погружали в жидкий азот. Во второй серии использовали замораживающую камеру УП-2 (СКБ Института проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины) с программным управлением. Замораживание проводили по 3-этапной программе с теми же скоростями замораживания. Трубочки маркировали и хранили в пластиковых контейнерах с завинчивающейся крышкой. Для размораживания использовали водяную баню 37°С/мин. После отогрева образцы спермы отмывали от криопротектора в среде Хенкса и проводили оценку жизнеспособности спермиев. Результаты и обсуждение Наилучшие результаты были получены при использовании среды 3 (51,7±3,0 млн/мл, группа a+b - 50%, при р<0,05). Однако при использовании криоконсервированной спермы в программе оплодотворения вне организма (ОВО), даже при тщательной отмывке, не удается избавиться от лецитиновых зерен желтка, что, по-видимому, влияет на условия культивирования. Учитывая это обстоятельство, мы использовали безжелточную среду, содержащую глицерин и сахарозу. После наслоения среды Menezo В2 кинезисграмма обоих образцов была идентична, однако через 12 ч пребывания в СО-инкубаторе (условия для ОВО) была отмечена явная астеноспермия в образцах с безжелточной средой. Известно, что спермальная плазма различна по белковоуглеводному составу и содержит множество компонентов, которые могут оказывать негативное влияние на гаметы на этапах низкотемпературного криоконсервирования. Эта причина побудила нас провести сравнительное изучение влияния криоконсервирования со средой 3 по первому методу на нативные и отмытые от спермальной плазмы образцы донорской спермы. Установлено, что процент спермиев группы а был выше в не отмытых перед криоконсервированием образцах в сравнении с отмытыми эякулятами (35 и 28 соответственно). Процент морфологически неповрежденных сперматозоидов в обоих случаях был практически неизмененным по отношению к контролю, однако процент жизнеспособных форм (с неповрежденной мембраной) был значительно ниже в отмытых образцах (65 и 57 соответственно, р<0,005). Необходимо отметить, что несмотря на повышение концентрации сперматозоидов в образце после отмывки, количество летальных повреждений не снизилось, в то время как уменьшилось количество спермодоз от одного донора, что, естественно, нерентабельно для работы банка. Таким образом, эти данные свидетельствуют о возможности замораживания спермиев человека в открытой системе простым и недорогостоящим методом, который может использоваться для хранения мужских гамет. На базе Института проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины были организованы Центр по лечению бесплодия и банк для использования в программе инсеминации криоконсервированной всесторонне исследованной спермой донора (ИКСД). 25 женщинам в возрасте 23-33 лет было проведено лечение методом искусственной инсеминации спермой донора, криоконсервированной по вышеописанному методу. Показание к проведению ИКСД - нарушения сперматогенеза у мужей супружеских пар (азооспермия, некроспермия). Проведено 45 циклов ИКСД. Получено 9 беременностей (36% - на пациента, 20% - на цикл инсеминации). Таким образом, использование криоконсервированной спермы позволяет провести тщательный контроль донорской спермы, обеспечить в нужное время материалом программы ИКСД, IVF, ICSI, дает возможность подбора донора по группам крови и фенотипическим параметрам. |
|
